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HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問題
點擊次數(shù):1829 發(fā)布時間:2019-06-21
HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問題
柱前衍生被測組分通過衍生化反應(yīng),轉(zhuǎn)化為衍生化產(chǎn)物,然后再經(jīng)過色譜柱進行分離。液相色譜法中柱前衍生的目的是:通過衍生化反應(yīng),使原來不能直接被檢測的組分轉(zhuǎn)化為能被所用檢測器檢測的物質(zhì);使被測組分與衍生化試劑有選擇地參加反應(yīng),而與樣品中的其他組分分離;改變被測組分在色譜柱的出峰次序,使之更有利于分離。柱前衍生的點是可以不必嚴格限制衍生化反應(yīng)條件,可以允許較長的反應(yīng)時間及使用各種形式的反應(yīng)器。其缺點是當一個復(fù)雜組分樣品經(jīng)過衍生化反應(yīng)后,有可能產(chǎn)生多種衍生化產(chǎn)物,給色譜分離帶來困難。
柱后衍生利用衍生反應(yīng)使被測物與相應(yīng)的試劑反應(yīng),以改變其物理或化學(xué)性質(zhì),使其被檢測到。例如將發(fā)色基團或熒光基團鍵合到樣品中去,多放大檢測靈敏度,柱后衍生系統(tǒng)開創(chuàng)了柱后衍生系統(tǒng)性能、價格及外形的標準。
HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問題?1)為什么要衍生?2)衍生化的分類?3)進行衍生,適用的化合物有哪些?4)進行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的缺點?
答:色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過程中用的化學(xué)試劑(一般稱為衍生化試劑或標記試劑)使樣品成分轉(zhuǎn)變相應(yīng)的衍生物之后進行分離檢測或進行檢測的方法。目的為:
1.將紫外—可見吸收功能基團引入被檢測對象或?qū)⑵滢D(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?,以提檢測靈敏度;
2.提對分析樣品的分離和選擇性。
從是否與HPLC系統(tǒng)聯(lián)機的角度,化學(xué)衍生法分為在線(on line)與離線(Off line)兩種。從發(fā)生衍生化的場合,分為柱前衍生法(pre-columnderivatization)與柱后衍生法(post-columnderivatization)兩種。
目前,在HPLC中,以離線的柱前衍生法(簡稱柱前衍生法)與在線的柱后衍生法(簡稱柱后衍生法)使用居多。